液相色谱仪测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠方法

一、检测方法：

依据国家标准：食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定（GB 5009.28-2016）。

二、客户要求：

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定。

三、 方法原理

样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉淀蛋白，

采用液相色谱分离、紫外检测器检测，外标法定量。

四、 试剂和材料

4. 1 试剂

4. 1. 1 氨水(NH 3 ·H 2 O)

4. 1. 2 亚铁氰化钾[K 4 Fe(CN) 6 ·3H 2 O]

4. 1. 3 乙酸锌 [Zn(CH 3 COO) 2 ·2H 2 O]

4. 1. 4 无水乙醇(CH 3 CH 2 OH)。

4. 1. 5 正己烷(C 6 H 14 )。

4. 1. 6 甲醇(CH 3 OH):色谱纯。

4. 1. 7 乙酸铵(CH 3 COONH 4 ):色谱纯。

4. 1. 8 甲酸(HCOOH):色谱纯。

4. 1. 9 苯甲酸钠 (C 6 H 5 COONa，CAS 号:532-32-1)，纯度≥99.0%;或苯甲酸

(C 6 H 5 COOH，CAS 号:65-85-0)，纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证

书的标准物质。

4. 1. 10 山梨酸钾 (C 6 H 7 KO 2 ，CAS 号:590-00-1)，纯度≥99.0%;或山梨酸

(C 6 H 8 O 2 ，CAS 号:110-44-1)，纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书

的标准物质。

4. 1. 11 糖精钠 (C 6 H 4 CONNaSO 2 ，CAS 号:128-44-9)，纯度≥99%，或经国家

认证并授予标准物质证书的标准物质。

4. 2 试剂配制

4. 2. 1 氨水溶液(1+99):取氨水 1mL，加到 99 mL 水中，混匀。

4. 2. 2 亚铁氰化钾溶液(92 g/L):称取 106 g 亚铁氰化钾，加入适量水溶解，

用水定容至 1000 mL。

4. 2. 3 乙酸锌溶液 (183 g/L)：称取 220 g 乙酸锌溶于少量水中，加入 30 mL

冰乙酸，用水定容 1000 mL。

4. 2. 4 乙酸铵溶液(20 mmol/L):称取 1.54 g 乙酸铵，加入适量水溶解，用水

定容至 1000 mL，经 0.22 μm 水相微孔滤膜过滤后备用。

4. 2. 5 甲酸-乙酸铵溶液(2mmol/L 甲酸+20mmol/L 乙酸铵):称取 1.54 g 乙酸

铵，加入适量水溶解，再加入 75.2 μL 甲酸，用水定容至 1000 mL，经 0.22μm

水相微孔滤膜过滤后备用。

4. 3 材料与仪器

4. 3. 1 高效液相色谱仪：谱析 LC-3000 高效液相色谱仪，配备 px-17 在线

脱气机、LC-3000 二元高压输液泵、LC-3000 自动进样器、LC-3000 柱温箱、LC-3000

双波长-紫外检测器。

4. 3. 2 色谱柱：①C 18 柱，4.60 mm * 250 mm，粒径为 5.0 μm。

②RP-AQUA 柱，，4.60 mm * 250 mm，粒径为 5.0 μm。

4. 3. 3 分析天平:感量为 0.001g 和 0.0001g。

4. 3. 4 涡旋振荡器。

4. 3. 5 离心机:转速>8000 r/min。

4. 3. 6 匀浆机。

4. 3. 7 针头过滤器：0.22 μm 有机滤膜。

4. 3. 8 抽滤瓶。

4. 3. 9 真空泵。

4. 3. 10 微孔滤膜 0.22 μm。

4. 3. 11 恒温水浴锅。

4. 3. 12 超声波发生器。

4. 3. 13 塑料离心管:50 mL。