液相色谱仪常见的10种故障原因及解决方法
2021-02-16 09:23:21来源：admin
高效液相色谱仪(HPLC) 是一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定，又能用于大量的制备分离，其应用范围已超过其它各种分离方法。高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，在使用过程中会遇见很多问题，今天谱析色谱小编聊聊常见故障原因及解决方法。
故障1：压力波动大，流量不稳定
原因分析：
系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使两者不能密封。
解决方法：
工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。若单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯中用超声波清洗。
故障2：自检时，出现“灯能量低”的错误
原因分析：
一般来说是由于系统中有挡光物，光路偏离，氘灯电源系统或氘灯灯泡已坏。
解决方法：
首先要检查光度室是否有挡光物；打开检测器光源室盖，检查氘灯是否点亮，如果氘灯不亮，则关机，更换新氘灯，换氘灯时，需注意型号；检查氘灯保险丝，看是否松动、氧化、烧断，如果氘灯保险丝出现故障，应立即更换；再开机重新自检，若仍出现上述故障，则重新安装软件后再进行自检。
故障3：出峰不准，峰分叉
原因分析：
造成这种情况的原因一般是色谱柱被污染，或柱头填料塌陷。
解决方法：
对于第1种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后，再用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30min以上。
对于第2种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷，去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填平，用与内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30min以上。
故障4：柱压升高
原因分析：
造成柱压升高的原因一般是由于缓冲液盐份如乙酸铵等，沉积柱内，或样品污染沉积，造成流体阻力加大所致。
解决方法：
对于第1种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应的提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30min。
对于第2种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后用甲醇正向冲洗柱子30min以上。
故障5：峰面积重复性不佳
原因分析：
主要原因有进样阀漏液；加样针不到位或液量不足。
解决方法：
对于第1种情况更换进样垫圈；对于第2种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。
故障6：流动相内有气泡
原因分析：
流动相内不断有气泡溢出，关闭泵，打开排空阀，按PURGE键清洗脱气，气泡不断的从过滤器冒出，进入流动相，无论打开PURGE键几次，都无法清除不断产生的气泡。主要是因为过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。
解决方法：
过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗15min即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36h，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开PURGE键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0mL/min，纯水冲洗过滤器1h左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗0.5h即可。
故障7：基线漂移
原因分析：
一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要半个小时的平衡时间，如果你用了缓冲溶液或缓冲盐，或在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，但如果在实验过程中发现基线漂移，则你要考虑下面的原因:①柱温波动；②流通池被污染或有气体；③紫外灯能量不足；④流动相污染、变质或由低品质溶剂配成；⑤样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线；⑥检测器没有设定在最大吸收波长处；⑦流动相的pH值没有调节好。
解决方法：
①控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱；②用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(最好断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)；③更换新的紫外灯；④检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂；⑤使用保护柱，如有必要，在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子；⑥将波长调整至最大吸收波长处；⑦加适量的酸或碱调至最佳pH值。
故障8：保留时间漂移
原因分析：
保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志，同一种样品，两次的保留时间相差不要超过15s，超过了30s可看做保留时间漂移，就无法进行定性，须要考虑以下原因：①温控不当；②流动相比例变化；③色谱柱没有平衡；④流速变化；⑤泵中有气泡。
解决方法：
①调好柱温，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱；②检查泵的比例阀是否有故障；③在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱；④重新设定流速；⑤从泵中除去气泡。
故障9：灵敏度不够
原因分析：
造成这种情况主要有以下原因:①样品量不足；②样品未从柱子中流出；③样品与检测器不匹配；④检测器衰减太多；⑤检测器时间常数太大；⑥检测器池窗污染；⑦检测池中有气泡；⑧记录仪测压范围不当；⑨流动相流量不合适；⑩检测器与记录仪超出校准曲线。
解决方法：
①增加样品量；②可根据样品的化学性质改变流动相或柱子；③根据样品化学性质调整波长或该换检测器；④调整检测器衰减；⑤降低时间参数；⑥清洗检测器池窗；⑦排出检测池中的气泡；⑧调整电压范围；⑨调整流动相流量；⑩检查记录仪与检测器，重作校准曲线。
故障10：基线噪音
原因分析：
规则的基线噪音产生的原因主要有①在流动相、检测器或泵中有空气(尖锐峰)；②漏液；③流动相混合不完全；④温度影响(柱温过高，检测器为加热)；⑤在同一条线上有其它电子设备(偶然噪声)；⑥泵振动。
不规则的基线噪音产生的原因主要有①漏液；②流动相污染、变质或由低质溶剂配成；③流动相个溶剂不相溶；④检测器或记录仪电子元件故障；⑤系统内有气泡；⑥检测器内有气泡；⑦流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音)；⑧检测器灯能量不足；⑨色谱柱填料流失或阻塞；⑩流动相混合不均匀或混合器不能正常工作。
解决方法：
规则的基线噪音解决方法:①流动相脱气，冲洗系统以除去检测器或泵中的空气；②检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音，如有必要更换泵密封；③用手摇动使混合均匀或使用粘度低的溶剂；④减小温度差异，或增加热交换器；⑤断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，并加以更正，采用精密级稳压电源；⑥在系统中加入脉冲阻尼器。
不规则的基线噪音解决方法:①检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要更换密封，检查流通池是否漏液；②检查流动相的组成；③选择互溶的流动相；④断开检测器和记录仪的电源，检查并更正；⑤用强极性溶液清洗系统；⑥清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器；⑦用1N的硝酸(不能用磷酸)清洗流通池；⑧更换检测器灯；⑨更换色谱柱；⑩维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置。
