高效液相色谱仪检测波长该如何选择？

高效液相色谱仪用检测波长测定时一般都选择在对样品有最大吸收的波长下进行，以获得最大的灵敏度和抗干扰能力。但应特别注意在选择测定波长时，必须考虑到所使用的流动相的紫外吸收性质。也就是说，使用紫外-可见光检测器时，溶剂不应吸收测定波长的紫外光，样品测定波长应当在溶剂紫外吸收波长上限以上。噪声降至10-4~10-5AU，才能保证检测的灵敏度，才能用于梯度洗脱。

另外，山东谱析科学仪器工程师认为，检测波长的选择涉及到以下2方面的因素：

1、目标物质在该波长处有较大（往往不是最大）吸收。

2、与目标物质同时经过检测器流通池的其他物质（主要是流动相与样品溶剂）在该波长有较小吸收。

液相色谱仪使用溶剂吸收波长的上限，就是透过波长的下限。波长的下限规定为溶剂在以空气为参比，样品池厚度为1厘米的条件下，恰好产生1.0吸光度时相对应的波长值，即溶剂透过率为10%时的波长。

溶剂中如果含有吸收紫外光的杂质，同样会使检测背景提高，灵敏度降低，且用作梯度洗脱时会引起严重漂移。因此，液相色谱仪系统对溶剂纯度要求较高，一般应使用分光纯或分析纯溶剂，在有条件时，色谱纯溶剂为首选。应注意不能使用化学纯及纯度更低的溶剂。有时需要对溶剂进行专门纯化处理。