谱析仪器：液相色谱仪分离条件的选择与优化

在色谱分析中，分离度、分析速度和柱容量三者之间的关系，呈现幻想的三角形，即其中任一因素都要受到另外两个因素的制约，因此至今也未曾找到高分离度、高柱容量和快速分析三者同时存在的色谱分析系统。在任何情况下，色谱分析都只能沿三角形中的一个边，去实现最佳参数的选择，即越要在一个方向上实现最佳化，则在另外两个参数上的损失也越大。
在高效液相色谱仪分析中，分离条件的优化是指在选定的色谱柱上（即柱容量恒定条件下）来实现：

（1）在保证一定分离度的条件下，实现分析速度的最优化。

（2）在保证一定分析时间的条件下，实现难分离物质对分离度的最优化。

一.减少柱内展宽，提高柱效

1、流动相：选用低粘度的流动相，有利于增大液相色谱仪分析样品组分在溶剂中的扩散系数Dm，减少传质阻力。

2、固定相：①粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力；②改进结构，尽可能采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动相传质阻力。

3、流速：从H-U曲线可知，HPLC的最佳流速在流速很小处，减少流速有利于提高柱效，但在实践中为加快分析速度，常采用比最佳流速高数倍的流速。

4、柱温：适当提高液相色谱仪柱温，可降低流动相粘度，减少传质阻力，但柱温升高将使分辨率降低，柱寿命短，易产生气泡，一般在室温下进行。
二. 柱外展宽
柱外谱带展宽又称“柱外效应”，系指从液相色谱仪进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起的色谱峰展宽，柱效下降。可分为：

1、柱前展宽  主要由进样引起，减小进样器的死体积，用阀门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。

2、柱后展宽  主要由接管、检测器流通池体积及检测器响应时间等因素所引起。因此，尽可能用短而内径细的接管，减少流通池体积，改进液相色谱仪检测器和记录系统的响应速度等都是克服柱后展宽的途径。

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