山东谱析GC-17气相色谱仪检测野生菱角壳中多糖化合物方法
2020-03-01 16:14:11来源：admin
山东谱析科学仪器有限公司专业从事高端气相色谱仪的研发、生产、销售通。过优化色谱分析方案，对从野生菱角壳中提取分离出多糖及对多糖的单糖组成进行了深进的气相色谱分析，为进一步开发和利用野生菱角资源提供了科学依据。
从20世纪60年代以来，人们逐渐发现多糖具有复杂多样的生物活性和功能，如多糖有免疫调节功能可作为广谱免疫促进剂，如作为药物可以治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂，促进核酸与蛋白质的生物合成等作用。菱，别名菱角、水菱角、风菱，为菱科菱属植物乌菱TrapabicomisOsbeck的种子，在我们居住地附近微山湖区有大量的野生或种植。据文献记载，其果壳、果柄、果、茎及叶柄均可进药，有健胃止痢、抗癌等作用；还可用于治疗胃溃疡、痢疾、食道癌、子宫颈癌及乳腺癌等。1、样品、试剂与仪器
市售的菱角往仁后，壳晒干，粉碎备用。单糖及双糖标准物质（半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、乳糖和蜜二糖）均购自ChemService，纯度大于98％。所用化学试剂除甲醇和乙醇为色谱纯外，其余均为分析纯。GC--17气相色谱仪（山东谱析仪器）。
2、实验方法
（1）多糖化合物的提取及纯化方法称取800g洗净晒干的菱角壳，加人1：1乙醇-乙醚混合液，65℃水浴回流1～3h往脂；残渣中加水，9O～100℃水浴提取4～6h，更换净水反复提取2～3次，合并深红色多糖提取液，过滤，浓缩。向提取液加人3／7倍体积的乙醇，离心分离沉淀，冻干得多糖粗品F1。向上清液中加人1.0倍体积的乙醇，离心分离沉淀，冻干得多糖粗品F2。依此方法，向上清液中先后加人1.5和4.0倍体积乙醇，分别得到多糖粗品F3和F4。。若直接向原多糖提取液中加人4倍体积的无水乙醇，则得到混合多糖粗品F5。用Sevag法除往多糖粗品中的蛋白质，H2O2法除往色素，透析72h后，浓缩，冻干，即得多糖纯品。
（2）多糖的水解取多糖样品10mg于安瓶中加人3moL／L三氟乙酸2mL，密封后在120℃恒温中水解6h，用氮气吹干三氟乙酸，加甲醇并吹干，水解产物加进0.6mL0.05mol／LNaOH溶液，再加5mgNaBH4，室温下反应8—10h，加少许乙酸分解过量的NaBH4，至无气泡产生为止。蒸干反应液，以酸性甲醇洗涤反应产物，蒸干甲醇液，重复3—4次以除往硼酸根，最后加进甲醇蒸干并于烘箱中105℃除净水分。
（3）乙酰化衍生法取水解得的单糖3mg，加进0.5mL吡啶，1mL乙酸酐，加热2h，冷却后加甲苯2mL，用N2吹干，加进氯仿，蒸馏水洗涤，用N2吹干得到棕黄色产物。此乙酰化的单糖醇用CHC13稀释后进行气相色谱仪分析。
（4）三甲基硅烷化衍生法取水解得的单糖样品6mg，加吡啶0.6mL，六甲基四硅胺烷0.2mL，三甲基氯硅烷0.2mL，振荡，静置，取上清液进行气相色谱仪析。
3、气相色谱仪分析条件
HP-5石英毛细管色谱柱（美国安捷伦公司），（50m×0.22mm×0.25μm）；进样口温度260℃，接口温度270℃，载气氦气流速1.2mL／min，分流比20：1， 程序升温：100℃→1O℃／min150℃→15℃/min260℃（40min）。
