血液中乙醇含量的测定—顶空气相色谱法

自2011年5月1日醉驾入刑以来，人们越来越重视酒后驾驶行为。此外，酒类饮料的主要成分是乙醇，大量饮用高浓度酒可能会造成酒精中毒甚至是死亡，过量饮酒同时也会使行为异常，从而发生意外甚至犯罪，比如酒后闹事、醉酒死亡等。因此，在发生某些自杀、凶杀的案件时，执法部门也要首先确定是否有酒精作用因素，所以从这方面来看，测定血液中乙醇的含量也有着至关重大的意义。

仪器和耗材

1、仪器

GC-17气相色谱仪（带氢火焰离子化检测器），分流/不分流毛细管进样口

AHS-32型全自动顶空进样器

专用毛细管色谱柱PEG-20M：30m×0.32mm×0.5um

气源：PAH-300氢气发生器，PXA-2000空气发生器，PXN-300氮气发生器

N2000色谱工作站

电脑、打印机

2 、试剂

乙醇、叔丁醇均为色谱纯试剂，血液中乙醇标准样品，样品提取与前处理

1） 样品前处理

本次方法验证参考GA/T842—2019《血液酒精含量的检验方法》的要求。分别移取100μL血液中乙醇样品，加入20mL顶空瓶中，然后加入500μL叔丁醇内标工作液，作顶空进样分析。将顶空瓶及装有血液中乙醇标准样品的采血管放入AP 500样品架中，使用AP 500全自动样品处理工作站，由工作站全自动完成采血管的抓取与转移，采血管信息的扫码录入，血样混匀，采血管开盖与关盖，血液样品的抽取与精准分推，顶空瓶的抓取与转移，顶空瓶的开盖与钳盖密封，顶空瓶内样品添加与稀释操作。

2） 标准曲线绘制

分别移取100μL系列浓度乙醇标准溶液(5、10、20、50、80、200、300 mg/100 mL)，加入20 mL顶空瓶中，然后均加入500 μL叔丁醇内标工作液，每个浓度点的标准溶液独立重复测定2次。

3） 样品分析

气相色谱条件

色谱条件：柱温：50℃；检测器：火焰离子化检测器；检测器温度：200℃；进样口温度：250℃。顶空自动进样器，顶空炉温：65℃；取样针温度：90℃；传输线温度：110℃；样品瓶加热平衡时间10 min。

回收率与精密度

取同一空白血样，分别添加乙醇标准溶液，使血液中乙醇的质量浓度分别为120mg / 100mL，平行6份，乙醇平均加标回收率为101%，RSD为1.35。

结果与讨论

本次方法验证满足GA/T 842—2019《血液酒精含量的检验方法》的要求。